L-天冬酰氨酶 基本信息 | |||
---|---|---|---|
CAS号 | 9015-68-3 | 分子式 | C24H24Cl3N3O6 |
分子量 | 556.8229 | 精确质量 | N/A |
PSA | N/A | LogP | N/A |
菌种培养采取大肠杆菌Escherichia Coli A.S.1.357,牛肉汁培养基100ml,蛋白胨1g,氯化钠0.5g和琼脂2~2.5g,在370C下,试管培养24h,茄瓶培养8h ,锥瓶培养16h。
大肠杆菌肉汤培养基;370C;2d→菌种培养肉汤菌种
种子培养培养基用10%的玉米浆接种量1%~1.5%,在370C下,通气搅拌培养6~8h。
肉汤菌种玉米浆;370C;6h→种子培养种子菌种
发酵罐培养取10%玉米浆接种量8%,在370C下,通气搅拌培养6~8h,离心,分离发酵液,得菌体,搅拌下加入2倍发酵液量的丙酮,压滤,滤饼过筛,自然风干成菌体干粉。
种子菌种玉米浆; 370C;7h→发酵罐培养发酵液丙酮→压滤,风干干菌体
提取、沉淀每千克菌体干粉加入pH8的硼酸缓冲液(0.01mol/L)10L,在搅拌下370C保温1.5h后,降温到300C左或,用乙酸溶液(5mol/L) 调节pH4.2~4.4,压滤,加入2倍于滤液体积的丙酮,静置3~4h,待沉淀完全,过滤,收集沉淀,晾干,即得干粗酶。
干菌体硼酸缓冲液;pH8;370C→提取提取液HAc;pH4.3→沉淀干粗酶
热处理取粗制酶1g 加入20ml 甘氨酸溶液(3g/L即0.3g),调节pH8.8,搅拌1.5h,离心,收集上清液,加热到600C,热处理30min。离心弃去沉淀,上清液加2倍体积的丙酮,析出沉淀,离心,收集酶沉淀,加pH8磷酸缓冲液(0.01mol/L),再离心弃去不溶物,得上清酶沉液。
干粗酶甘氨酸;600;30min→热处理酶溶液
精制、冻干调节pH8.8酶溶液,离心弃支沉淀,上清液再调pH7.7,在上清液中加聚乙二醇(500g/L即50%),使聚乙二醇的浓度达到160g/L(16%),在温度2~50C时,放置4~5d,有沉淀析出,离心分离沉淀。加蒸馏水使之溶解,加4倍溶液量的丙酮,沉淀,同法重复1次,沉淀用pH6.4磷酸缓冲液(0.05mol/L)溶解,得精制酶溶液。调节pH至5~5.2,再加聚乙二醇(500g/L),如此重复处理1次。再调pH7.7,加聚乙二醇(500 g/L)溶解,在无菌条件下用6号垂熔漏斗过滤,分装,冷冻干燥,即得注射用(天)门冬酰胺酶成品,每支10000U或20000U。
酶溶液聚乙醇;不同pH处理→精制无热原酶液
无菌分装→冻干(天)门冬酰胺酶冻干制剂
1.本品是一种对肿瘤细胞具有选择性抑制的药物,为抗肿瘤酶制剂。可用于静注、静滴、肌注和鞘内注射。
2.抗肿瘤酶制剂。对急性淋巴细胞白血病缓解率在50%以上。对急性粒细胞型白血病和急性单核细胞白血病有一定疗效,对恶性淋巴瘤疗效也较好。优点是对于常用药物治疗后复发的病例也有效,缺点是单独使用不仅缓解期短,且易产生耐药性。